(1)稀釋
①以無菌操作將檢樣25g(mL)放于含有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內或滅菌乳钵內，經充分振搖或研磨做成1: 10的均勻稀釋液。
②用lmL滅菌吸管吸取1: 10稀釋液lmL,注入含有9mL滅菌生理鹽永或其他稀釋液的試管內，振搖試管混勻，做成1: 100的稀釋液。
③另取lmL滅菌吸管，按上條操作依次做10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用1支lmL滅菌吸管。
④根據對檢樣汙染情況的估計，一般選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種三管。
⑤乳糖發酵試驗
將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發酵管內，每一稀釋度接種三管，置36°C士q#°C培養箱內，培養24h±2h，如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣，則可報告大腸菌群陰性，如有產氣者則繼續做以下實驗。
(2)分離培養將產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上，置36°c±rc培養箱內培養18～24h，然後取出，觀察菌落形態，並做革蘭染色和證實試驗。
(3)證實試驗在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1～2個進行革蘭染色，同時接種乳糖發酵管，置36°C士1°C培養箱內培養24h±2h，觀察產氣情況。凡乳糖管產氣、革蘭染色爲陰性的無芽孢杆菌，即可報告爲大腸菌群陽性。
(4)報告根據證實爲大腸菌群陽性的管數，查MPN檢索表，報告每100mL(g)大腸菌群的MPN值。
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